如何快速進(jìn)行ELISA試劑盒酶免疫測(cè)定

ELISA試劑盒由于各種抗原成份，包括小分子的半抗原，ELISA試劑盒均可用以制備特異性的抗血清或單克隆抗體，利用此抗體作為試劑就可檢測(cè)標(biāo)本中相應(yīng)的抗原，因而免疫測(cè)定的使用規(guī)模極廣，在臨床查驗(yàn)中可用于測(cè)定：
1) 體液中的各種蛋白質(zhì)，包括含量很少的蛋白質(zhì)如甲胎蛋白等。
2) 激素，包括小分子量的甾體激素等。
3) 抗生素和藥物。
4) 病原體抗原，HBsAg、HBeAg等。
5) 另外，也可利用純化的抗原檢測(cè)標(biāo)本中的抗體，例如抗-HBs等。
5．符號(hào)的免疫測(cè)定
ELISA試劑盒如上所述，免疫測(cè)定是一種很敏感的測(cè)定辦法，抗原抗體反響后直接測(cè)定構(gòu)成的沉積或濁度，敏感度可達(dá)5~10μg/ml，但在臨床查驗(yàn)中，某些待測(cè)物在標(biāo)本中的含量遠(yuǎn)低于這一水平，因而要尋覓增加敏感度的辦法。符號(hào)的免疫測(cè)定是將檢測(cè)試劑中的抗原或抗體用可微量測(cè)定的物質(zhì)加以符號(hào)，經(jīng)過(guò)測(cè)定符號(hào)物來(lái)進(jìn)步敏感度。在放射免疫測(cè)定和中，ELISA試劑盒符號(hào)物分別為放射性核素和酶，zui后用測(cè)定放射性和酶生機(jī)來(lái)計(jì)算待檢物的量，敏感度可比直接測(cè)定沉積物進(jìn)步數(shù)百至數(shù)千倍。在符號(hào)免疫測(cè)定中，一般參加過(guò)量的符號(hào)試劑以確保與待測(cè)物*反響。以符號(hào)抗體（Ab ※）檢測(cè)抗原（Ag）為例，反響式如下：
Ag+ Ab※ →AgAb※+Ab※
在反響產(chǎn)品中有與Ag結(jié)合的Ab※和游離和Ab※ ，如不將兩者別離而測(cè)定符號(hào)物，測(cè)得的成果將為兩者之和。因而，游離符號(hào)物與結(jié)合符號(hào)物的別離是符號(hào)免疫測(cè)定中的重要進(jìn)程。可采用多種手段，固相載體是其中之一。如將抗原或抗體包被在固相載體上，然后再與符號(hào)的抗原或抗體直接反響，結(jié)合的符號(hào)物被固定在載體上，而游離的符號(hào)物留于溶液中。這樣能夠經(jīng)過(guò)洗刷將游離的Ab※除掉，結(jié)合符號(hào)物的測(cè)定可在固相上進(jìn)行。IgM抗體一般為保護(hù)性抗體具有免疫性。因而IgM抗體的測(cè)定，對(duì)某些流行癥如甲型肝炎有較高的臨床確診價(jià)值。
1.3 抗原抗體反響
1.3.1 可逆性
抗原與抗體結(jié)合構(gòu)成抗原抗體復(fù)合物的進(jìn)程是一種動(dòng)態(tài)平衡，其反響式為：
Ag+Ab→Ag·Ab
抗體的親和力（affinity）是抗原抗體間的固有結(jié)合力，能夠用平衡常數(shù)K表明：
K=[Ag·Ab]／[Ag][Ab]
ELISA試劑盒高親和力抗體的抗原結(jié)合點(diǎn)與抗原的決定簇在空間構(gòu)型上十分適合，兩者結(jié)合結(jié)實(shí)，不易解離。解離后的抗原或抗體均能堅(jiān)持原有的結(jié)構(gòu)和活性，ELISA試劑盒因而可用親和層析法來(lái)提純抗原或抗體。在抗血清中，特異性的IgG抗體僅占總IgG中的極小部分。用親和層析法提取的特異性抗體，稱為親和層析純抗體，使用于免疫測(cè)定中可得到更好的效果。