ELISA操作嚴(yán)格要求定當(dāng)做出好實(shí)驗(yàn)

我們知道，可以用作ELISA試劑盒測定的標(biāo)本很廣泛，包括了體液、分泌物和排泄物等，均可作標(biāo)本以測定其中某種抗體或抗原成份。這些標(biāo)本收集的時(shí)間、方法和保存都有一定的要求。今天上海恒遠(yuǎn)為您解說：ELISA操作嚴(yán)格要求定當(dāng)做出好實(shí)驗(yàn)。

按試劑盒說明書的要求準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)中需用的試劑。ELISA中用的蒸餾水或去離子水，包括用于洗滌的，應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的。自配的緩沖液應(yīng)用pH計(jì)測量較正。從冰箱中取出的試驗(yàn)用試劑應(yīng)待溫度與室溫平衡后使用。試劑盒中本次試驗(yàn)不需用的部分應(yīng)及時(shí)放回冰箱保存。

ELISA試劑盒的配制：對(duì)于每種細(xì)胞因子應(yīng)仔細(xì)閱讀說明書，注意每批的細(xì)節(jié)。在使用細(xì)胞因子前，瞬時(shí)離心試劑瓶，盡可能多地收回其中的細(xì)胞因子。根據(jù)每批說明書中的細(xì)節(jié)，將凍干的細(xì)胞因子復(fù)溶。一般待測抗原標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍的可通過將標(biāo)準(zhǔn)品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml到15pg/ml。可利用標(biāo)準(zhǔn)的ELISA操作流程、放大試劑盒、第三類試劑、或改變酶底物系統(tǒng)可在一定范圍內(nèi)提高靈敏度。為了優(yōu)化靈敏度，建議孵育標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本。若使用過氧化物酶作為顯色系統(tǒng)，應(yīng)嚴(yán)禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉，疊氮鈉可抑制過氧化物ELISA試劑盒酶的活性。

ELISA試劑盒的操作因固相載體的形成不同而有所差異，國內(nèi)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)一般均用板式點(diǎn)。
洗板方法：
① 手工洗板，吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘，根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次。
② 自動(dòng)洗板，如果有自動(dòng)洗板機(jī)，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過程中。