上海研域生物無菌實驗室在操作注意使用方法

1.玻璃器皿的消毒和清潔

新購玻璃器皿的處理新購玻璃器皿應(yīng)用熱番筧水洗刷，流水沖刷，再用1%～2%鹽酸溶液浸泡，以除去游離堿，再用水沖刷。對容量較大的器皿如試劑瓶、燒瓶或量具等，經(jīng)清水洗凈后應(yīng)注入濃鹽酸少量，漸漸滾動，使鹽酸布滿容器內(nèi)壁數(shù)分鐘后傾出鹽酸，再用水沖刷。

2.污染玻璃器皿的處理

①一般試管或容器可用3%煤酚皂溶液或5%shi炭酸浸泡，再煮沸30分鐘，亦可用番筧或合成洗滌劑洗刷使盡量發(fā)生泡沫，然后用清水沖刷至無番筧停止。然后用少量蒸餾水沖刷。

②細菌培育用的試管和培育皿可先行集中，用1kg/cm2高壓滅菌15～30分鐘，再用熱水洗滌后，用番筧洗刷，流水沖刷。

③吸管運用后應(yīng)集中于3%煤酚皂溶液中浸泡24小時，逐支用流水重復(fù)沖刷，再用蒸餾水沖刷。

④油蠟沾污的器皿，應(yīng)獨自滅菌洗滌，先將沾有油污的物質(zhì)棄去，倒置于吸水紙上，100℃烘干半小時，再用堿水煮沸，番筧洗滌，流水沖刷。必要時可用二jia苯祛污

⑤染料沾污的器皿，可先用水沖刷，后用清潔或稀鹽酸洗脫染料，再用清水沖刷。一般染色劑呈堿性，所以不宜用番筧的堿水洗滌。

⑥玻片可置于3%煤酚皂溶液中浸泡，取出后流水沖刷，再用番筧或弱堿性煮沸，自然冷卻后，流水沖刷。被結(jié)核桿菌污染或不易洗凈的玻片，可置于清潔液內(nèi)浸泡后再沖刷。

3.無菌器材和液體的預(yù)備

將玻璃用具中的培育皿、培育瓶、試管、吸管等按上述辦法洗凈烘干后，用一潔凈紙包好瓶口并把吸管尾端塞上棉花，裝入干凈的鋁盒或鐵盒中，于120℃的干燥箱中干燥滅菌2小時，取出備用。關(guān)于手術(shù)器械、瓶塞、作業(yè)服以及新制造的PBS洗液，則選用高壓蒸氣滅菌法，即在15磅的條件下，加熱20分鐘。而關(guān)于MEM培育液、小牛血清和消化液等需用G5或G6濾器負壓抽濾后運用。

4.在無菌操作過程中，重要的是要堅持作業(yè)區(qū)的無菌、清潔。

因而，在操作前20～30分鐘要先啟動超凈臺和紫外燈，并仔細洗手和消毒。在操作時，禁止喧嘩，禁止用手直接拿無菌物品，如瓶塞等，而必須用消毒的止血鉗、鑷子等。培育瓶應(yīng)在超凈臺內(nèi)操作，并且在開啟和加蓋瓶塞時需重復(fù)用酒精燈燒。關(guān)于吸管應(yīng)先用手拿后1/3處，戴上膠皮ru tou，并用酒精燈燒烤之后再吸液體。

5.常用清潔液的制造法

①重鉻suan鉀清潔液：可根據(jù)不同需要，選用下列的任何一種濃度。先將重鉻suan鉀溶于水中，再漸漸參加濃硫酸。注意，此時可發(fā)生高熱，應(yīng)防止容器破裂。重鉻suan鉀清潔液除污力強，腐蝕性大，應(yīng)避免觸摸皮膚和衣服。為防止吸收空氣的水分而變質(zhì)，此液應(yīng)貯存于帶蓋的容器中。如清潔效能較差，可再參加少量重鉻suan鉀及濃硫酸，還可持續(xù)運用。直到液體變藍綠色，即不能再用。制造重鉻suan鉀清潔液時，宜用耐高溫的陶瓷缸或耐酸搪瓷或塑料容器。運用玻璃器皿時，應(yīng)特別注意防止發(fā)生高熱而破裂，切忌用量筒來制造。

②磷酸三鈉將其配成5%～10%水溶液，可用于洗滌玻璃器皿上的油污，但經(jīng)常運用腐蝕玻璃，使器皿表面含糊、粗糙。

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